Q1: 为什么需要对我的小鼠品系进行冷冻保存?
资源保障:为转基因、基因敲除等珍贵品系提供“遗传保险”,防止因疾病、繁殖失败、意外死亡等因素导致品系丢失。
节约成本:长期维持一个不常使用的小鼠品系,其饲养和人力成本极高。冷冻保存可大幅降低长期维持费用。
安全保障:当您的动物设施发生生物污染时,冷冻的胚胎/精子是“净化”和恢复该品系最安全、可靠的遗传资源保种方式。
资源共享与运输:冷冻的胚胎或精子是国际公认的、最安全的遗传物质交换形式,避免了活体运输的复杂性和生物安全风险。
Q2: 胚胎冷冻和精子冷冻,我该如何选择?
当阳性小鼠数量公鼠≥2,雌鼠数量≥5时,推荐选择【胚胎冷冻】:
优势:复苏后可直接获得基因背景完全明确的子代,能100%还原原品系的遗传信息。本中心小鼠胚胎复苏成功率稳定(高达95%),是品系保藏的金标准。
适用场景:对遗传背景一致性要求高的所有品系,特别是近交系、多基因修饰品系。
当阳性小鼠雌鼠较少甚至没有,公鼠≥2只可选择【精子冷冻】:
优势:成本相对较低,操作更快捷,可从单只雄鼠获得大量配子。
挑战与前提:复苏时需要通过体外受精来获得胚胎,再移植产生子代。复苏时需提供该品系对应的、健康的野生供体雌鼠(通常是C57BL/6J等背景)。
适用场景:主要用于保存珍稀遗传资源,或作为胚胎冷冻的补充备份。
Q3: 冷冻和复苏整体流程是什么样的?
a. 咨询与方案制定:提供小鼠品系信息,共同确定最佳保存方案(胚胎/精子)。
b. 样本采集:在本中心设施进行。胚胎采集需提供超排处理的雌鼠,精子采集需提供健康的雄鼠。
c. 冷冻处理与储存:使用Vitrification玻璃化技术,将样本安全转移至液氮中长期储存。
d. 质量检测(可选):对冷冻样本进行复苏活力检测,确保库存质量。
e. 复苏与品系重建:在需要时,提供复苏服务,通过胚胎移植或体外受精,交付健康的离乳小鼠。
Q4: 小鼠如何提供?
精子冷冻
小鼠要求:雄鼠,2-3只,12-18W(最佳),公鼠最好正常繁育过后代,冻存5个冻存管/品系。
精子冷冻复苏可以一次性得到较多数量的小鼠,年龄范围在一周内。
胚胎冻存
a. 品系内胚胎冻存小鼠要求:雄鼠2-3只12-18W,雌鼠至少≥5只,3-4W或8-12W。正常情况下可冻存80-100枚胚胎。
b.胚胎冷冻复苏效率基本上维持在80%左右。
c. 若与B6配后冻存:雄性小鼠,2-3只12-18W,中心提供雌性B6小鼠3-4W,10只。
Q5: 复苏的成功率如何?如何保证?
成熟技术:采用国际公认的玻璃化冷冻等先进技术,对细胞损伤极小。
严格质控:每个环节都有标准操作程序和质量控制点。
经验保障:对于标准品系,我们承诺具有竞争力的高复苏率。